المحتوى
الحمض النووي
حمض الديوكسي ريبونوكلييك والبروتينات. يتم تنظيم الحمض النووي في وحدات تسمى الجينات ، كل منها رموز لرنا معين أو تسلسل البروتين. تتم دراسة الجينات لمعرفة التركيب والوظائف البيولوجية والتطور والمرض والعديد من الجوانب الأخرى للنظم الحية. لدراسة الجينات بالتفصيل ، يجب عزل الحمض النووي وتنقيته من الخلايا ذات الاهتمام.
استخراج الحمض النووي
على الرغم من أن الحمض النووي من خلية واحدة يمكن استخلاصه ودراسته ، إلا أنه لا يكفي لرؤيته بالعين المجردة. للحصول على كمية كافية للتخزين المؤقت ، كلما زاد عدد الخلايا التي لديك للعمل مع الأفضل (عدة ملايين).
تختلف البروتوكولات الدقيقة اختلافًا كبيرًا في الاعتبار للخصائص الفريدة لعينات محددة ، ولكن الخطوات العامة هي التجانس والتحلل والهضم والفصل والجمع. من الأفضل تنفيذ الإجراء في أنبوب زجاجي أو بلاستيكي صغير (حسب حجم العينة).
عادةً ما يتم مزج العينة أو تحضيرها لفصل الخلايا تمامًا عن بعضها البعض. هذا يجعل مكونات الخلية في متناول الكواشف التالية. ثم تضاف المنظفات أو الإنزيمات إلى المتجانسة لتربية أغشية الخلايا (والأغشية النووية إذا كانت الخلايا حقيقية النواة) لتحرير الحمض النووي. عند هذه النقطة ، يحيط الحمض النووي بالبروتينات والدهون والكربوهيدرات --- أي شيء آخر موجود في الخلايا.
قد يكون من الضروري إجراء عملية هضم إنزيمي إضافية لتحطيم البروتينات حتى لا ترتبط بالحمض النووي وتتداخل مع مجموعتها. يتم فصل الحمض النووي عن باقي محتويات الخلية بإضافة كحول بارد أو نقي أو إيثيلي أو إيزوبروبيل. الحمض النووي ليس قابلاً للذوبان في هذه المشروبات الكحولية لذا سيتكثف لمحاولة تقليل ملامسته للكحول. ثم يتم تجميع الحمض النووي المكثف ، عادة عن طريق الطرد المركزي --- أو التخزين المؤقت.
تخزين الحمض النووي
تكون عملية جمع الحمض النووي عن طريق التخزين المؤقت فعالة عندما يتم الحصول على كمية كبيرة من الحمض النووي من عملية الاستخراج. إنها أيضًا طريقة عرض ممتازة لأن التشابك المثير للإعجاب للحمض النووي النقي مرئي بوضوح.
لتخزين الحمض النووي ، يجب تنفيذ خطوة الفصل بعناية. إذا لم يكن جزءًا من خليط كاشف التحلل المضاف مسبقًا ، فيجب إضافة محلول ملح مركز (كلوريد الصوديوم) إلى المحلول قبل خطوة إضافة الكحول. يسكب الكحول البارد ببطء على جانب أنبوب الاختبار ليشكل طبقة فوق المحلول المائي ، وتجنب الخلط. إذا تم بشكل صحيح ، فإن الكحول سيشكل طبقة خاصة به أعلى الطبقة المالحة. ثم يأتي التخزين المؤقت.
لجمع الحمض النووي من الطبقة المالحة ، ضع بعناية قضيب تحريك الزجاج على الرغم من أن طبقة الكحول حتى تمس أسفل الأنبوب. تدور ببطء بين قضيب الأصابع ، أثناء مشاهدة الواجهة بين الطبقتين. في حالة وجود عدد كاف من الحمض النووي ، سوف تتجمع معًا في الواجهة بين الطبقات لتشكيل كتلة شفافة حليبي. قم بتدوير قضيب لفّ الحمض النووي المحيط به (أي الجزء المخزن مؤقتًا) واسحبه خارج الأنبوب. يمكن نقل الحمض النووي إلى أنبوب آخر من الكحول النقي للتخزين أو لمزيد من التحليل.