المحتوى
بمجرد تشغيل عينات الحمض النووي على هلام الاغاروز والتقاط صورة ، يمكنك حفظ الصورة في وقت لاحق ، وعند هذه النقطة يمكنك تحليل النتائج وتفسيرها. تعتمد أنواع الأشياء التي تبحث عنها على طبيعة تجربتك. إذا كنت تقوم بإصبع الحمض النووي ، على سبيل المثال ، فسوف ترغب في مقارنة حجم قطع الحمض النووي من عينتين - من المشتبه فيه ومن عينة مسرح الجريمة ، ربما. إذا كنت تعمل مع البلازميدات من البكتيريا ، على النقيض من ذلك ، قد تحتاج للتأكد من أن البلازميد يحتوي على الملحق. وبالتالي ، ستعتمد كيفية تفسير الجل الخاص بك جزئيًا على التجربة التي قمت بها. ومع ذلك ، هناك بعض القواعد العامة التي يمكنك تطبيقها.
بدءاً من أعلى الصورة ، قم بقياس المسافة إلى كل شريط في ممر "المعايير" في الجل الخاص بك (المعروف أيضًا باسم السلم). يحتوي خط المعايير على قطع من الحمض النووي معروفة بالفعل ، لذلك يجب أن تعرف حجم كل منها قبل بدء تجربتك. قم أيضًا بقياس المسافة التي قطعتها العصابات في كل من ممرات العينات.
قم بتقسيم المسافة بين كل معيار وكل فرقة في العينات التي تنتقل عن طريق المسافة إلى أسفل الجل. والنتيجة تسمى الحركية النسبية. يمكنك استخدام برنامج جدول البيانات لإجراء الحساب لك إذا كان سيجعل هذه الخطوة أسرع.
أدخل التنقل النسبي وحجم كل معيار في برنامج جدول البيانات الخاص بك ، ثم استخدم أداة الرسوم البيانية لبرامج جداول البيانات لإنشاء رسم بياني لهذه البيانات مع إمكانية التنقل النسبية على المحور السيني والحجم على y.
ضع خطًا للرسم البياني باستخدام الانحدار غير الخطي. راجع قسم "تعليمات برامج جداول البيانات" إذا كنت بحاجة إلى معرفة كيفية القيام بذلك. يجب أن ينتهي بك الأمر معادلة ، ربما واحدة مماثلة لما يلي:
y = (0.3) × ^ -2.5
لاحظ أن x هنا ستكون التنقل النسبي ، بينما y هو الحجم. لاحظ أيضًا أن المعادلة قد تحتوي على أرقام مختلفة تمامًا عن الأس والمعامل - يتم تقديم هذه المعادلة فقط كمثال افتراضي.
خذ الحركية النسبية للعصابات من عينتك وقم بتوصيلها كـ x لحساب حجم قطع الحمض النووي في نطاقات العينة.
افترض أن المعادلة المشتقة من برنامج جداول البيانات الخاص بك كانت بالفعل y = (0.3) x ^ -2.5 ، وكان التنقل النسبي لنطاق عينة معين هو 0.68. استبدال 0.68 في المعادلة الخاصة بك ، يمكنك العثور على ما يلي:
y = (0.3) (0.68) ^ - 2.5
باستخدام الآلة الحاسبة الخاصة بك ، يمكنك رفع 0.68 إلى -2.5 وتجد ما يلي:
ذ = (0.3) (2.62)
ذ = 0.786
والذي سيكون عندئذٍ الحجم المقدر بالكيلوباس من الحمض النووي في إحدى العصابات من عينتك.
البلازميدات
لاحظ أنك قد تحتاج أو لا تحتاج إلى استخدام الإرشادات الموجودة في هذا القسم. وغالبا ما يستخدم الكهربائي الاغاروز هلام لتأكيد أن البلازميد يحتوي على إدراج معين. إذا كنت لا تعمل مع البلازميدات ، يمكنك تخطي هذا القسم. إذا كنت كذلك ، يمكنك اتباع هذه التعليمات.
لاحظ أنه إذا كنت تعمل باستخدام البلازميدات غير المقطوعة أو المخرمة ، فلا يمكنك تقدير الحجم باستخدام الإجراء الوارد في القسم 1 أعلاه. ولهذا السبب تهاجر البلازميدات غير المصقولة والمختلطة بمعدلات مختلفة من الحمض النووي الخطي.
قارن عدد الفرق في كل حارة. تذكر أن إنزيم التقييد يقطع الحمض النووي في المواقع التي يحدث فيها تسلسل معين يسمى موقع التقييد. إذا تم التعامل مع عينة باستخدام إنزيمات تقييد TWO ، يجب أن يكون هناك شريط للإدخال وشريط لما تبقى من البلازميد. ولهذا السبب ، سيحيط بالإدراج موقعان للتقييد ، كل منهما لإنزيم مختلف ، لذلك ستؤدي عمليات القطع في كلا هذين الموقعين إلى تحرير الإدخال من البلازميد. وعلى النقيض من ذلك ، فإن القطع في موقع واحد فقط سيحول البلازميد إلى DNA خطي. يجب أن تتميز عينة مقطوعة بدون إنزيمات تقييد أو إنزيم تقييد واحد ، بشريط واحد ، في حين أن عينة القطع التي تحتوي على اثنين من إنزيمات التقييد يجب أن تحتوي على شريطين.
ابحث عن العصابات التي أنشأتها DNA البلازميد المسمى. يحتوي البلازميد المنقط على قطعة واحدة فقط ، لذلك يهاجر ببطء أكثر من البلازميد المقطوع. قطع البلازميدات بدورها تهاجر ببطء أكثر من الحمض النووي غير المصقول.
قم بتقدير حجم الإدراج باستخدام الإجراء الموضح في القسم 1 وحدد ما إذا كان يطابق توقعاتك (والتي ستختلف حسب التجربة.)