المحتوى
اللوني السائل عالي الأداء (HPLC) هو تقنية مخبرية تستخدم لفصل وتحديد المركبات. إنه نوع من كروماتوجرافيا الأعمدة التي تعتمد على أقطاب مختلفة من المركبات في حل لفصلها. يختلف HPLC عن كروماتوغرافيا العمود القياسي لأنه يستخدم الضغط لفرض الحل خلال العمود بسرعة أكبر ، وبالتالي ينتج عنه نتائج أسرع وأكثر دقة في بعض الأحيان. الهدف هو فصل المركبات في العمود وجعلها تخرج بشكل منفصل.
Coelution
بسبب سرعة HPLC واعتمادها على أقطاب مختلفة من المركبات ، يمكن لمركبتين لهما بنية وأقطاب مماثلة الخروج من جهاز اللوني في نفس الوقت أو تقريبًا في نفس الوقت. هذا هو المعروف باسم coelution. Coelution يجعل تحديد بالضبط أي جزء من الخليط شطب في أي نقطة صعبة.
مركبات كثف
يستخدم HPLC عادة عمودًا زجاجيًا مليئًا بالخرز المصنوع من مواد مختلفة. تحتوي الخلائط التي يتم فرضها عبر العمود على مواد كيميائية ترتبط بنقاط قوة مختلفة للخرز. تحدد قوة الرابط ، الذي يعتمد على التشابه في القطبية ، مدة ارتباط المادة الكيميائية بالخرز قبل إطلاقها. ترتبط بعض المركبات بقوة بحيث لا يتم إطلاقها بشكل أساسي من الخرزات الموجودة في العمود ولا يتم قياسها أبدًا في المحلول الخارج من العمود.
كلفة
تتضمن تقنيات الفصل المعملية النموذجية تطوير اختبار أو طريقة فصل ، ثم تنفيذ ذلك الفحص لفصل المركبات الفردية عن حل. ومع ذلك ، ينتج عن هذا عادة حلول متعددة تحتاج أيضًا إلى الخضوع لإجراءات ، مما يؤدي إلى زيادة هائلة في التعقيد. على الرغم من أن HPLC يمكنه غالبًا تبسيط وتسريع هذه العملية ، إلا أن تكلفة تطوير جهاز HPLC يمكن أن تصبح هائلة. إن تطوير جهاز HPLC ، على الرغم من أنه أكثر كفاءة ، يعد مكلفًا أكثر من تطوير فحوصات أخرى لفصل المركبات. هذا يجعلها غير قابلة للاستمرار من الناحية المالية للعديد من المختبرات الصغيرة المملوكة ملكية خاصة.
تعقيد
لا يستخدم HPLC فقط لفصل المركبات البسيطة ، بل يستخدم أيضًا لعزل بروتينات معينة من خليط خلوي. في هذه الحالة ، يتم عادةً طلاء الخرزات الموجودة في العمود بجسم مضاد خاص بالبروتين الذي تحتاج إلى جمعه. تربط البروتينات الأجسام المضادة ويتم تمرير المحلول المتبقي من خلال العمود ، ثم يتم إطلاق البروتينات باستخدام محلول آخر وجمعها. يتطلب ذلك فنيًا ماهرًا للغاية لمراقبة العمود في جميع الأوقات والتأكد من أن العملية تعمل تمامًا كما هو مخطط لها.