المحتوى
إن حساب عيار الفيروس هو طريقة معقدة للقول إن العالم يحسب عدد الفيروسات في عينة معينة. لحساب التتر من الفيروسات ، يصيب العلماء لوحات من البكتيريا النامية بمحلول فيروسي بتركيزات مختلفة ومعرفة عدد الفيروسات في المحلول الأصلي عن طريق حساب البكتيريا التي ماتت بسبب العدوى الفيروسية.
التخفيفات التسلسلية
ارتدِ القفازات واملأ 10 أنابيب استنشاقية ب 9 مل من المرق وقم بتسمية "10 ^ -1" و "10 ^ -2" و "10 ^ -3" وما إلى ذلك حتى "10 ^ -10". هذه الأنابيب سوف تستخدم للتخفيفات التسلسلية الفيروسية المستخدمة لحساب عيار فج. نظرًا لأن الفيروسات يمكن أن تنمو إلى تركيزات عالية بشكل لا يصدق ، تحتاج إلى تخفيفها من أجل حسابها بشكل فعال. كل أنبوب يمثل تخفيف عشرة أضعاف من الفيروس.
خذ 1 مل من ثقافة الفيروس التي ترغب في حساب عيار phage ونقلها إلى الأنبوب المعنون "10 ^ -1" باستخدام ماصة. خلط الأنبوب جيدا. هذا هو أول تخفيف عشرة أضعاف.
تأخذ 1 مل من ثقافة مختلطة من الأنبوب الخاص بك المسمى "10 ^ -1" ونقله مع ماصة جديدة إلى الأنبوب التالي ، المسمى "10 ^ -2." مزيج هذا الأنبوب كذلك.
متابعة هذا النمط لإنشاء سلسلة التخفيف التسلسلي. سوف ينتهي بك الأمر مع 9 أنابيب من 9 مل وأنبوب واحد من 10 مل. سيتم تخفيف الأحمال الفيروسية في أنابيبك في أي مكان من 10 مرات (الأنبوب الأول) أو 100 مرة (الأنبوب الثاني) إلى عشرة مليارات مرة (الأنبوب النهائي).
إعداد لوحات لحساب عيار
خذ 10 أنابيب من أجار التربتين الناعم و 10 لوحات من بيتري وقم بتمييزها لتتوافق مع أنابيب التخفيف التسلسلية.
قم بفك الأغطية حتى لا تنطفئ في الحرارة ثم ضع أنابيب أجار في دورق من الماء المغلي. هذا سيذوب الأجار حتى تتمكن من سكبه في أطباق بتري.
انقل أنابيبك إلى حمام مائي ساخن بحد أدنى 45 درجة مئوية. هذا سيضمن أن أجارك لا يصلب في الأنابيب قبل أن تتاح لك فرصة صبه في طبق بتري.
أضف قطرتين من الثقافة البكتيرية إلى أجار الخاص ومزجها بلطف. هذه هي البكتيريا التي سيتم قتلها ، مما يتيح لك حساب عدد جزيئات الفيروس في محلول معين.
إضافة 1 مل من كل التخفيف التسلسلي إلى أنبوب أجار المقابل لها في حين لا تزال الأنابيب في حمام الماء الساخن. على سبيل المثال ، يجب إدخال 1 مل من التخفيف التسلسلي 10 ^ -1 في أنبوب أجار المسمى "10 ^ -1".
خلط كل أنبوب ثم صب كل أنبوب في لوحة بيتري مع التسمية المقابلة. سيؤدي ذلك إلى إنشاء طبقة رقيقة من الآجار تم تلقيحها بالبكتيريا والفيروسات في كل طبق. دع لوحات تنمو بين عشية وضحاها في حاضنة.
عد وحساب فيروس عيار
خذ اللوحات الخاصة بك من الحاضنة وفحصها. يجب أن تشاهد مناطق غائمة في جميع أنحاء اللوحة حيث نمت البكتيريا ، باستثناء البقع الصافية الصغيرة التي تسمى لويحات. هذه اللوحات عبارة عن بقع من البكتيريا الميتة ، وتمثل كل لوحة فيروسًا واحدًا.
ابحث عن لوحة بها ما بين 30 و 300 لوحة واحسب العدد الدقيق للوحات الموجودة على تلك اللوحة.
خذ عدد اللوحات الموجودة على طبقك واضربه بعشرة أرقام. إذا عدت 157 لوحة ، فستحصل على 1570 لوحة.
اضرب الرقم الذي حصلت عليه في الخطوة السابقة بعكس الرقم في أنبوب التخفيف. على سبيل المثال ، إذا كانت اللوحة التي حددتها هي لوحة 10 ^ -5 ، فستضرب 1570 في 10 ^ 5 للحصول على 157000000. هذا الرقم النهائي هو عيار فج ، ويمثل عدد الفيروسات لكل مل من ثقافتك الأصلية.