المحتوى
- لدى Electrophorresis تحليل عينة محدود
- قياسات الكهربائي ليست دقيقة
- نموذج البدء الكبير مطلوب
- جزيئات معينة فقط يمكن تصورها
- الكهربائي هو انخفاض الإنتاجية
الكهربائي للهلام هو تقنية يتم فيها فصل الجزيئات البيولوجية عن بعضها البعض وتحديدها في البحوث البيولوجية أو التشخيص الطبي. منذ تطورها في السبعينيات ، كانت هذه التقنيات لا تقدر بثمن في تحديد الجينات (DNA) ومنتجات الجينات (RNA والبروتين) التي تهم الأبحاث. في السنوات الأخيرة ، ظهرت تقنيات أحدث تعطي المزيد من الخصوصية والتفاصيل حول ما يحدث في الأنظمة الحية. في حين أن هذه لم تحل محل تقنيات رحلان كهربائي ، والتلاعب المتقدم يمكن أن يوسع من صلاحية هذه التقنية ، من المهم أن ندرك ما يمكن أن يفعله الكهربائي للهلام.
لدى Electrophorresis تحليل عينة محدود
الكهربي هو محدد لأي نوع من الأنسجة التي قمت باخذ عينات منها. على سبيل المثال ، إذا قمت بتشغيل لطخة جنوبية (نوع من الرحلان الكهربائي) على مسحة الخد ، فأنت تنظر إلى الجينات من الخلايا الظهارية لخدك وليس في أي مكان آخر في جسمك. في بعض الأحيان ، قد يكون ذلك مفيدًا ، لكن الباحثين يهتمون كثيرًا بتأثيرات أكثر انتشارًا.
يمكن للتقنيات مثل التهجين في الموقع (ISH) أخذ قسم من الأنسجة وتحليل التعبير الجيني في كل منطقة صغيرة من تلك العينة.وبالتالي ، يمكن للباحثين النظر في كل منطقة دماغية في عينة من الـ ISH ، في حين أن تقنيات الرحلان الكهربائي يمكنها فقط النظر إلى مناطق قليلة في وقت واحد.
قياسات الكهربائي ليست دقيقة
يمكن للفصل الكهربي للهلام أن يفصل بشكل فعال البروتينات المتشابهة بأوزان مختلفة (هذه تقنية تسمى النشاف الغربي). يمكن أن تفصل بينهما بشكل أكثر دقة من خلال تقنية تعرف باسم رحلان كهربائي ثنائي الأبعاد ؛ هذا شائع في البروتينات.
لسوء الحظ ، فإن جميع القياسات المصنوعة من هذه التقنية هي شبه كمي في أحسن الأحوال. من أجل الحصول على الكتلة (الوزن) الدقيقة للبروتينات ، يجب استخدام التحليل الطيفي للكتلة بعد تنقية البروتين بواسطة الكهربائي. علاوة على ذلك ، تعتمد مقارنة الكميات النسبية للجزيئات المختلفة على كثافة الشريط (الظلام) في مناطق مختلفة على الجل. تحتوي هذه الطريقة على درجة من الخطأ ، وعادة ما يتم تشغيل العينات عدة مرات للحصول على نتائج نظيفة.
نموذج البدء الكبير مطلوب
الكهربي هو تقنية لعزل الجزيئات الحيوية المختلفة وتحديدها بصريًا. يتم ذلك عن طريق تمرير تيار كهربائي عبر الجل لفصل الجزيئات المشحونة ذات الأوزان المختلفة. إذا لم يكن الجزيء الذي تهتم به شائعًا بدرجة كافية ، فسيكون نطاقه غير مرئي تقريبًا ويصعب قياسه.
يمكن تضخيم الحمض النووي والحمض النووي الريبي (DNA) والحمض النووي الريبي (RNA) إلى حد ما قبل تشغيل الكهربائي ، لكن ليس من العملي القيام بذلك مع البروتينات. لذلك ، هناك حاجة إلى عينة الأنسجة الكبيرة لتشغيل هذه المقايسات. هذا يمكن أن تحد من فائدة هذه التقنية ، وخاصة في التحليل الطبي. من المستحيل عمليا تشغيل الكهربائي على عينات من خلية واحدة ؛ يتم استخدام التدفق الخلوي والكيمياء المناعية بشكل شائع لتقييم التعبير الخلوي للبروتينات. تقنية تسمى PCR ممتازة في قياس كميات صغيرة من الحمض النووي الريبي بدقة.
جزيئات معينة فقط يمكن تصورها
الكهربائي هو ممتاز في فصل وتحديد الجزيئات الحيوية متوسطة إلى كبيرة الحجم. ومع ذلك ، فإن العديد من الجزيئات التي يرغب الباحثون في النظر إليها أصغر ؛ لا يمكن قياس الهرمونات الصغيرة ، الناقلات العصبية ، والأيونات عن طريق الكهربائي. هذا لسببين: لا يتفاعلون بشكل صحيح مع التحضير الكهربائي (عادةً تقنية تسمى SDS PAGE) ، وحتى لو فعلوا ذلك ، فهي صغيرة جدًا بحيث لا يمكن فصلها بشكل صحيح وستسرع أسفل الجل. بدلاً من ذلك ، يتم قياس هذه الجزيئات عن طريق تقنيات مثل RIAAs (الاختبارات المناعية الراديوية) و ELISAs (مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم).
الكهربائي هو انخفاض الإنتاجية
يكون الرحلان الكهربي منخفض الإنتاجية بشكل عام ، مما يعني أنه لا ينتج بيانات بسرعة خاصة. التباين الكهربائي ، حيث يمكنك إلقاء نظرة على حفنة صغيرة من جزيئات الحمض النووي الريبي في وقت واحد ، مع PCR (تفاعل البلمرة المتسلسل) ، والذي يمكنه تقييم آلاف العينات في وقت واحد. وبالمثل ، يمكن لقياسات التدفق الخلوي أخذ قياسات من آلاف الخلايا الفردية وإقامة علاقات معقدة ، بينما ينظر الكهربائي الإلكتروني إلى الخلايا بشكل جماعي ولا يمكنه إجراء مثل هذه التمييزات الدقيقة. PCR والتدفق الخلوي تمثل عمليات متوازية ومتسلسلة بشكل كبير على التوالي ، وكلاهما يفوق بكثير قدرات الكهربائي الكهربائي لتوليد بيانات البحوث.