المحتوى
كمي عينة الحمض النووي الريبي الخاص بك عن طريق قياس امتصاص الأشعة فوق البنفسجية (UV). سوف يستخدم مقياس الطيف النانوي إسقاط واحد أو اثنين من الميكروليتر من عينتك ، والتي يمكنك استردادها. الطيف الضوئي الأخرى تتطلب عينة أكبر بكثير. معامل الانقراض للنيوكليوتيدات في الطول الموجي للأشعة فوق البنفسجية من 260nm في مسار الضوء 1 سم هو 20. بناء على هذا معامل الانقراض ، وامتصاص الحمض النووي الريبي 40µg / مل في ظل نفس الظروف هو واحد. باستخدام هذه المعلومات ، يمكنك حساب تركيز عينة الحمض النووي الريبي.
قم بتخفيف ، إذا لزم الأمر ، من عينتك. التخفيف القياسي ل microcuvette هو 1:40. جعل هذا التخفيف عن طريق إضافة عينة 2µL RNA إلى 78µL الماء المعقم.
اتبع بروتوكولات مقياس الطيف الضوئي الخاص بك لمعايرة الجهاز باستخدام فراغ ، ثم حدد الكثافة البصرية للعينة عند طول موجة UV البالغ 260 نانومتر.
اضرب امتصاص عينتك من خلال عامل التخفيف بنسبة 40μg RNA / mL. ستكون المعادلة: "تركيز الحمض النووي الريبي (ميكروغرام / مل) = (OD260) × (عامل التخفيف) × (40µg RNA / مل) / (1 OD260 وحدة)" (Hofstra.edu) على سبيل المثال: إذا قمت بتخفيف العينة الخاصة بك عن طريق 1:40 وقراءة الامتصاصية الخاصة بك كانت 0.08 ، سوف تتضاعف 0.08 × 40 × 40 = 128 ميكروغرام / مل = 0.13 ميكروغرام / ميكرولتر
معرفة نقاء عينتك عن طريق أخذ قراءة الامتصاصية الأخرى في الطول الموجي للأشعة فوق البنفسجية 280nm. ستشير نسبة OD 260 / OD 280 إلى ما إذا كانت عينتك ملوثة بالبروتين أو الفينول - وعلى أي مستوى. نتيجة 1.8 إلى 2.0 تشير إلى جودة الحمض النووي الريبي.