المحتوى
الكيمياء الحيوية تدرس جزيئات مثل الحمض النووي ، الحمض النووي الريبي والبروتينات. تقنيات النشاف هي ما يستخدمه العلماء لفصل هذه الأنواع من الجزيئات. في الخلايا ، توجد كخليط. يسمح النشاف للباحثين بالعثور على بروتين واحد من بين الكثير ، مثل إبرة في كومة قش. يتم النشاف عمومًا عن طريق ترك خليط من الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي أو تدفق البروتين عبر لوح من الجل. يسمح هذا الجل لجزيئات صغيرة بالتحرك بشكل أسرع من الجزيئات الكبيرة. يتم بعد ذلك الضغط على الجزيئات المنفصلة ضد الغشاء ، مما يساعد على نقل الجزيئات من الجل إلى الغشاء. تلتصق الجزيئات بالغشاء ، ولكن تبقى في نفس المكان ، بصرف النظر عن بعضها البعض ، كما لو كانت لا تزال في الجل.
لطخة غربية
النشاف الغربي هو أسلوب شائع لفصل البروتينات حسب الحجم ، ولكن في الأعمدة المستقيمة. تسمح هذه الأعمدة المتوازية للباحثين بمقارنة كمية البروتين عبر عينات مختلفة يتم تشغيلها بجوار بعضها البعض ، مثل ممرات البولينج. على سبيل المثال ، إذا كنت تختبر تأثير كميات مختلفة من الدواء على نمو الخلايا ، فستتعامل مع أربع مجموعات مختلفة من الخلايا بكمية مختلفة من الدواء. ثم يمكنك كسر الخلايا المفتوحة وتشغيل بروتينات كل مجموعة في ممرات منفصلة على هلام. يتيح لك نشر البروتينات بهذه الطريقة أن ترى ماذا يفعل تركيز الأدوية المتزايد لبروتين معين.
لطخة الشمالية
يستخدم النشاف الشمالي للكشف عن الحمض النووي الريبي. يمكن كسر الخلايا مفتوحة للافراج عن الحمض النووي الريبي. يمكن تشغيل الحمض النووي الريبي من أنواع مختلفة من الخلايا في ممرات منفصلة على هلام. الجل ينتشر الحمض النووي الريبي مختلفة من حيث الحجم. تسمح هذه الصفوف المتوازية والأنيقة من الحمض النووي الريبي للباحث بمقارنة نوع الخلية التي تحتوي على مقدار الحمض النووي الريبي. تسمح هذه الطريقة للباحث بتحديد ما إذا كانت الخلايا من مرض معين تحتوي على أكثر من هذا الحمض النووي الريبي أو أقل من هذا الحمض النووي الريبي. قد يكشف النشاف الشمالي كيف يعمل المرض على مستوى إنتاج الحمض النووي الريبي.
لطخة الجنوبية
النشاف الجنوبي هو تقنية النشاف الأصلية ، التي بدأت نظام التسمية. اخترعه إدوين الجنوبي. يتم استخدام اللطخة الجنوبية للكشف عن كمية الحمض النووي في الخليط. كما هو الحال مع البروتين والحمض النووي الريبي ، يمكن إطلاق الحمض النووي للخلية عندما يتم كسر تلك الخلية. يفصل النشاف الجنوبي الحمض النووي عن أنواع الخلايا المختلفة حسب الحجم. ينتشر الحمض النووي من كل عينة في الممرات الأنيقة المتوازية. يمكن اكتشاف قطع فردية من الحمض النووي باستخدام مسبار مشع أو فلوري ، والذي تم تصميمه لربط هذه القطعة من الحمض النووي فقط. تخبر إشارة الطاقة الصادرة عن مسبار مشع ، أو ومضات الضوء من إشارة الفلورسنت ، الباحثين عن مقدار جزء الدنا الموجود في كل عينة.
بقع أخرى
تم تعديل تقنيات النشاف الرئيسية الثلاثة - الغربية والشمالية والجنوبية - بطرق مختلفة لاكتشاف جزيئات مختلفة قليلاً. اللطخة الغربية مقابل اللطخة الجنوبية ، على سبيل المثال. بالكشف عن البروتين والحمض النووي ، على التوالي. تتم كل تقنية معدلة بشكل عام بالطريقة المعتادة ، ولكنها تستخدم طريقة مختلفة لاكتشاف الجزيء الذي ينتشر في الممرات المتوازية. الكشف عن البقع الجنوبية الغربية جزيئات البروتين عالقة الحمض النووي. الكشف عن البقع الشمالية الغربية جزيئات البروتين عالقة في الحمض النووي الريبي. تكتشف البقع البعيدة عن جزيئات البروتين الملتصقة بالبروتينات الأخرى.