المحتوى
تتمثل إحدى الطرق الكلاسيكية لتحديد تركيز الميكروبات في العينة في تخفيف العينة ، وتنمية الميكروبات على الأطباق وعد المستعمرات. تنمو الميكروبات المطلية من وحدة تشكيل مستعمرة تتكون من خلية واحدة أو أكثر إلى مستعمرة مرئية يمكن رؤيتها وإحصائها. البكتيريا هي الميكروب الأكثر شيوعا لتقييم باستخدام تعداد اللوحة. تُستخدم تعدادات المستعمرة للكشف عن الميكروبات في التربة والماء والغذاء. تؤكد بروتوكولات عد المستعمرات على مقاربة دقيقة ومنهجية.
عينات تمييع والطلاء والحضانة
إذا قمت ببساطة بتشويه عينة من الميكروب على صفيحة أجار ، فسترى الكثير من الوحدات المكونة للمستعمرات بحيث تمتزج المستعمرات الفردية معًا ، مما يجعل من المستحيل عدها. لحل هذه المشكلة ، امزج العينة في وسط سائل ، واتخاذ كمية صغيرة من هذا الخليط وتخفيفه أكثر. كرر هذه العملية من 6 إلى 10 مرات. نشر التخفيف النهائي على طبق أجار واحتضانه لمدة أربعة إلى سبعة أيام قبل حساب المستعمرات.
دليل العد
الخدعة الأساسية في عد المستعمرات هي حساب كل نقطة مستعمرة مرة واحدة. تتمثل إحدى الطرق في إعداد طبق بيتري على خلفية شبكية وعد المستعمرات في كل خلية شبكة ، والانتقال بنمط منهجي عبر جميع الخلايا. إن وضع علامات على المستعمرات التي تم حسابها على ظهر طبق بيتري يمكن أن يكون أيضًا طريقة مفيدة. عمومًا ، ستحتاج إلى حساب ثلاث لوحات على الأقل ؛ فقط استخدام الألواح التي تحتوي على 30 إلى 300 مستعمرة لعمل استدلالات قوية ، تقترح شبكة الأحياء الدقيقة ، وهي شركة تقدم خدمات استشارية للمختبرات والمصنعين. يجب إعادة طلاء اللوحات ذات المستعمرات التي يعد عددها كبيرًا أو التي تحتوي على عدد قليل جدًا من المستعمرات من تخفيف جديد.
العد الآلي
الخطأ البشري يضيف إلى الوقت الذي ينطوي عليه عد المستعمرات يدويًا. لتحسين كل من الدقة والكفاءة ، ضع طبق بيتري في جهاز عد تلقائي للمستعمرة. تلتقط عدادات المستعمرات التلقائية صورة للطبق ، وتفصل المستعمرات عن الخلفية ، ثم تستخدم خوارزمية لحساب المستعمرات على اللوحة. يمكن أن تواجه الخوارزميات صعوبات في التمييز بين المستعمرات عندما يكون مستعمرون أو أكثر يمسّون على الحواف ، لذلك يعد هذا مجالًا لتطوير البرامج المستمر.
جعل العد أكثر تعقيدا
دقة حساب كثافة الميكروب من تهم المستعمرة لديها بعض القيود. يمكن أن تكون الوحدات المكونة للمستعمرة خلية واحدة أو سلسلة من الخلايا أو مجموعة كاملة من الخلايا. الافتراض هو أن المستعمرة تمثل خلية واحدة ، لذلك يمكن أن تكون التركيزات المحسوبة من تعداد المستعمرات منخفضة. تحتاج الميكروبات المختلفة إلى ظروف نمو مختلفة ، ولا تمثل المستعمرات الموجودة على اللوحة سوى تلك الميكروبات التي تزدهر على وسائط النمو في ظل ظروف الحضانة تلك. بالإضافة إلى ذلك ، لا يسجل عد المستعمرات الخلايا الميتة ، وهذا اعتبار مهم عندما تحتاج إلى تركيز الخلايا في العينة الأصلية.