يستخدم الكيميائيون تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء ، أو HPLC ، لفصل مخاليط المركبات. بشكل عام ، تتكون الطريقة من حقن عينة في عمود حيث يتم خلطها مع مذيب واحد أو أكثر. المركبات المختلفة تمتص ، أو "تلتصق" ، إلى العمود بدرجات مختلفة ؛ وبما أن المذيب يدفع المركبات عبر العمود ، فإن أحد مكونات الخليط سيخرج من العمود أولاً. تقوم الأداة بالكشف عن المركبات عند خروجها من العمود وتنتج مخططًا كروماتوجرافيًا يتكون من قطعة مع وقت استبقاء على المحور السيني وكثافة الإشارة من جهاز الكشف على المحور ص. عندما تخرج المركبات من العمود ، فإنها تنتج "قمم" في اللوني. بشكل عام ، كلما انفصلنا عن القمم وأضيقها في اللوني ، كلما كان الدقة أعلى. يعتبر العلماء أن القرار 1.0 أو أعلى يمثل فصلًا مناسبًا.
قم بقياس عرض القمتين المتجاورتين في المخطط اللوني من خلال الإشارة إلى حيث تكون قيم المحور السيني في قاعدة كل قمة. يمثل المحور السيني وقت الاستبقاء ، وعادةً ما يقاس بالثواني. وبالتالي ، إذا بدأت الذروة عند 15.1 ثانية وتنتهي في 18.5 ثانية ، يكون عرضها (18.5 - 15.1) = 3.4 ثانية.
حدد أوقات الاستبقاء عن طريق الإشارة إلى الوقت ، أي الموقع على المحور السيني ، والذي يتوافق مع مواقع الحد الأقصى للقمم. عادةً ما تكون هذه القيمة في منتصف المسافة بين القيمتين المستخدمتين لحساب العرض في الخطوة 1. والمثال الوارد في الخطوة 1 ، على سبيل المثال ، سيظهر بحد أقصى حوالي 16.8 ثانية.
احسب الدقة ، R ، بين قمتين
R = (RT1 - RT2) / ،
حيث يمثل RT1 و RT2 أوقات استبقاء الذروتين 1 و 2 ، ويمثل W1 و W2 عرض القمم المأخوذة في قواعدهما. استمرارًا للمثال من الخطوتين 2 و 3 ، تُظهر ذروة واحدة وقت استبقاء يبلغ 16.8 ثانية وعرض 3.4 ثانية. إذا عرضت الذروة الثانية وقت استبقاء قدره 21.4 ثانية بعرض 3.6 ثانية ، فإن الدقة ستكون
R = (21.4 - 16.8) / = 4.6 / 3.5 = 1.3.