كيفية حساب تركيز الخلايا

غالبًا ما يحتاج العلماء والفنيون إلى حساب تركيز الخلايا في التعليق. على سبيل المثال ، عندما يسحب المريض دمه في مكتب الطبيب ، يمكن للمختبر استخدام طرق معينة للبحث عن كمية خلايا الدم البيضاء في حجم معين من الدم. هذا يعطي الطبيب الكثير من المعلومات حول صحة مريضها ، وخاصة جهاز المناعة لديه وما إذا كان يعاني من عدوى أو مرض آخر. مثل هذه الاختبارات يمكن أن تبحث عن العديد من الخلايا الأخرى في الدم وكذلك السوائل الشوكية وغيرها من سوائل الجسم ، مثل تعداد خلايا الحيوانات المنوية في السائل المنوي لأغراض الخصوبة. يحسب العلماء أيضًا تركيزات الخلايا من البكتيريا والخمائر والكائنات الحية الدقيقة الأخرى لأغراض عديدة تتراوح من البحوث البيئية إلى التقنيات الصناعية. يتم تدريس أحد الأساليب الأكثر شيوعًا أيضًا في العديد من فصول البيولوجيا في الكليات ، ويستخدم جهازًا يسمى غرفة العد.

قبل أن يدخل تعليق الخلية إلى غرفة العد ، قد يحتاج إلى تخفيف لأنه قد يحتوي على آلاف أو ملايين الخلايا. في هذه الحالة ، لا يمكن حساب الخلايا بشكل معقول. لتخفيف العينة ، استخدم ماصة معقمة لوضع عشرة ميكروليترات من محلول الخلية في أنبوب اختبار يحتوي على 90 ميكروليتر من مادة مخففة. يعتمد نوع المادة المخففة على نوع الخلية. تخلط جيدا. هذا المحلول الآن أكثر عشر مرات من العينة الأولية ، وبالتالي فإن عامل التخفيف هو 10^-1. تسمية ذلك. كرر هذا عدة مرات ، باستخدام ماصة معقمة في كل مرة ، حتى يخفف الحل بما فيه الكفاية. إذا قمت بتخفيفها للمرة الثانية ، فإن أنبوب الاختبار الثاني كان أكثر ضعفًا بمقدار 100 مرة من المحلول الأولي ، لذلك كان عامل التخفيف 10^-2 وهلم جرا.

قد تحتاج إلى محاولة العديد من التخفيفات لتحديد عامل التخفيف المناسب لغرفة العد. تعتبر حجرة العد أساسًا مربعًا صغيرًا جدًا وواضحًا ومستطيلًا بعمق دقيق وشبكة دقيقة منقوشة في الجزء العلوي. ومن المعروف أيضا باسم عدادة الكريات ، أو في بعض الأحيان عدادة الكريات. والهدف من ذلك هو أن يكون التعليق مخففًا بدرجة كافية بحيث عندما يتم عرضه في حجرة العد ، لا تتداخل أي خلايا ، ويتم توزيعها في جميع أنحاء الشبكة بطريقة موحدة. ماصة تعليق المخفف الذي يحتوي على الخلايا في البئر في غرفة العد ، حيث سوف يستقر في غرفة الشبكة من خلال العمل الشعري. ضع غرفة العد على المسرح المجهر وشاهده تحت طاقة منخفضة.




تحتوي الشبكة على مربعات مصنوعة من مربعات أصغر. حدد ما يقرب من أربعة أو خمسة مربعات ، أو العديد منها تحتاج إلى حساب 100 خلية على الأقل ، في نمط من اختيارك ، مثل الزوايا الأربع وساحة المركز. إذا كانت الخلايا كبيرة ، فقد تكون المربعات الكبيرة ، ولكن إذا كانت الخلايا صغيرة ، فيمكنك اختيار المربعات الأصغر بدلاً من ذلك.

قد يختلف الحجم المحدد لكل مربع شبكة عن طريق حساب الشركة المصنعة للغرفة ، ولكن في كثير من الأحيان ، يبلغ عمق الغرفة 0.1 ملليمتر ، وتبلغ مساحة المربعات الكبيرة 1 ملليمتر مربع ، وتبلغ مساحة المربعات الصغيرة 0.04 ملليمتر مربع. المربعات الكبيرة ، إذن ، يبلغ حجمها 0.1 ملليمتر مكعب. على سبيل المثال ، افترض أنك قمت بحساب ما مجموعه 103 خلايا في خمس مربعات ، وأنك خففت العينة الأولية حتى كان عامل التخفيف 10^-2.

إذا كان لكل مربع شبكة حجم 0.1 ملم مكعب وتم حساب خمسة ، فإن الحجم الكلي للغرفة التي تم حسابها كان 0.5 ملليمتر مكعب ، وكان هناك 103 خلايا. مضاعفة لجعله 1 ملليمتر مكعب سيجعلها 206 خلايا. واحد سنتيمتر مكعب يعادل 1 ملليلتر ، وهو قياس مفيد للسوائل. هناك 1000 ملليمتر مكعب في سنتيمتر مكعب. لذلك ، إذا كان هناك سم مكعب ، أو مليلتر ، من التعليق ، لكنت أحصيت 206000 (206 × 1000) خلية. هذا هو ما يبدو كمعادلة:




حجم مربع الشبكة × عدد المربعات المحسوبة = إجمالي حجم التعليق المحسوب

عدد الخلايا ÷ حجم التعليق المحسوب = عدد الخلايا لكل ملليمتر مكعبة

عدد الخلايا لكل ملليمتر مكعبة × 1000 = عدد الخلايا لكل ملليلتر

ستحتاج إلى حساب أي تخفيف تم إجراؤه لجعل الحل الأولي قابلاً للتحصيل تحت المجهر. في هذا المثال ، عامل التخفيف هو 10^-2. لحساب التركيز الأولي للحل:

عدد الخلايا لكل مليلتر عامل التخفيف = تركيز الخلية

على سبيل المثال ، يبلغ عدد الخلايا لكل مليلتر 206000 ، ويقسم ذلك على 10^-2 (0.01) يعطي تركيز خلية يبلغ 20،600،000 خلية لكل ملليلتر في العينة الأولية.